技术主题/Technology Feature
割手密线粒体DNA的简易快速提取方法 
田春艳1 
,
王先宏1 
,
李富生1 ,
何丽莲1 ,
娄红波1 ,
杨清辉1 ,
肖关丽1 ,
唐荣平2
,
王先宏1 ,
李富生1 ,
何丽莲1 ,
娄红波1 ,
杨清辉1 ,
肖关丽1 ,
唐荣平2
1 云南农业大学甘蔗研究所, 昆明, 650201;
2 云南临沧高等师范专科学校数理系, 临沧, 677000
作者 通讯作者
《分子植物育种》印刷版, 2015 年, 第 13 卷, 第 27 篇 doi: 10.13271/j.mpb.013.001141
收稿日期: 2014年12月01日 接受日期: 2015年02月05日 发表日期: 2015年03月15日
2 云南临沧高等师范专科学校数理系, 临沧, 677000
作者 通讯作者
《分子植物育种》印刷版, 2015 年, 第 13 卷, 第 27 篇 doi: 10.13271/j.mpb.013.001141
收稿日期: 2014年12月01日 接受日期: 2015年02月05日 发表日期: 2015年03月15日
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推荐引用：
Tian C.Y., Wang X.H., Li F.S., He L.L., Lou H.B., Yang Q.H., Xiao G.L., and Tang R.P., 2015，A simple and rapid extraction method for mitochondrial DNA of saccharum spontaneum, Fenzi Zhiwu Yuzhong (Molecular Plant Breeding)，13(5): 1141-1145 (田春艳，王先宏，李富生，何丽莲，娄红波，杨清辉，肖关丽，唐荣平，2015，割手密线粒体DNA的简易快速提取方法，分子植物育种，13(5): 1141-1145）
摘要
高效快速地分离提取高质量的线粒体DNA (mtDNA)是研究植物线粒体基因及其起源进化的重要前提。为获得高质量的mtDNA进行割手密资源的线粒体基因序列扩增及测序分析，本研究以割手密黄化苗为材料，通过简单差速离心分离得到线粒体，经DNaseⅠ消化处理，去除核DNA杂质得到较纯的线粒体，然后经过5% SDS和蛋白酶K充分裂解线粒体，利用饱和的苯酚/氯仿(1:1)和氯仿两次抽提除去蛋白质，并经过RNase A的消化处理除去RNA，无水乙醇沉淀等一系列操作得到mtDNA。所提取的mtDNA样品经紫外吸收光度测定，琼脂糖凝胶电泳和PCR扩增分析其浓度和纯度，结果表明利用该方法提取的mtDNA纯度高，完全能满足后续PCR分析及分子克隆测序的要求。该方法不仅DNA提取纯度高，操作简单、快速经济，可为今后开展甘蔗及其各野生种的研究提供技术支持。
关键词
甘蔗；割手密；线粒体DNA；提取方法
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